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基質(zhì)金屬蛋白酶MMP2/9明膠酶譜法試劑盒操作原理

更新時間:2015-07-17      瀏覽次數(shù):1263

   基質(zhì)金屬蛋白酶MMP2/9明膠酶譜法試劑盒采用酶譜法(zymography)檢測MMP-2、MMP-9 活性。Zymography 是一種廣為使用的、基于SDS-PAGE 電泳和反相凝膠染色的蛋白酶檢測方法,其靈敏度可達1 nM,高于ELISA。


    其基本原理和程序是:制備加有膠原酶底物的SDS-PAGE 凝膠,含蛋白酶的樣品在此凝膠中進行電
泳, 電泳結(jié)束后取出凝膠與酶反應(yīng)Buffer 孵育,凝膠染色與脫色。凝膠中由于含底物蛋白而被深
染,形成深色背景,但在有蛋白酶條帶的位置,蛋白酶將降解凝膠中的底物蛋白,因而不被染色
而形成透亮區(qū)域,從而能同時指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶譜)及活性。


    本試劑盒提供MMP-2、MMP-9 特異蛋白底物及酶學(xué)反應(yīng)緩沖液,可檢測少至0.1~0.5 μl 血液中的MMP-2、MMP-9 酶譜及活性,檢測靈敏度~1 nM。試劑盒可進行50 次標準小膠檢測,如果小膠加樣孔為10~15個,則總計可檢測500~750 個樣品。

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