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PI染色實(shí)驗(yàn)代測

PI染色實(shí)驗(yàn)代測
服務(wù)項(xiàng)目:冰切包埋→冰凍切片→PI染色→熒光拍照→PI染色分析
樣本運(yùn)輸要求:常溫運(yùn)輸(4%多聚甲醛固定,可加冰袋運(yùn)輸)
信帆生物提供各類實(shí)驗(yàn)代測,更多服務(wù)項(xiàng)目歡迎致電咨詢,我們將竭誠為您服務(wù)!

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  • 更新時(shí)間:2024-10-26
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詳細(xì)介紹

PI染色實(shí)驗(yàn)代測

PI染色簡介:

碘化丙啶( propidium iodide,PI )檢測早期死亡細(xì)胞膜通透性狀態(tài)的不同是區(qū)分細(xì)胞凋亡和壞死的一一個(gè)重要指標(biāo),凋亡細(xì)胞在進(jìn)入最終溶解階段前,細(xì)胞膜通透性無明顯改變,相對分子質(zhì)量大的與DNA結(jié)合的熒光染料(如PI )不能進(jìn)入凋亡細(xì)胞內(nèi),而相對分子質(zhì)量小的熒光染料(如Hoechest 3342或33258等)仍能被細(xì)胞攝取。應(yīng)用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可區(qū)分和壞死細(xì)胞,細(xì)胞內(nèi)DNA出現(xiàn)Hoechest 3342 標(biāo)記而不出現(xiàn)PI標(biāo)記的為凋亡細(xì)胞。

 

PI染色原理:

主要是根據(jù)細(xì)胞凋亡時(shí)在細(xì)胞、亞細(xì)胞和分子水平上所發(fā)生的特征性改變。這些改變包括細(xì)胞核的改變、細(xì)胞器的改變、細(xì)胞膜成分的改變和細(xì)胞形態(tài)的改變等,其中細(xì)胞核的改變具有特征性。

 

PI實(shí)驗(yàn)說明:

1、PI染色拍照使用的是熒光拍照。

 

實(shí)驗(yàn)步驟(僅供參考):

1、收集細(xì)胞{數(shù)目約(1~ 5)×106個(gè)/mL},500 ~ 1000 r/min離心5min,棄去培養(yǎng)液。

2、3ml PBS洗滌1次。

3、離心去PBS,加入冰預(yù)冷的70%的乙醇固定,4℃,1—2小時(shí)。

4、離心棄去固定液,3mlPBS重懸5min。

5、400目的篩網(wǎng)過濾1次,500—1000r/min離心5min,棄去PBS

6、用1ml PI染液染色,4℃避光30min。

7、流式細(xì)胞儀檢測:PI用氬離子激發(fā)熒光,激光光波波長為488nm,發(fā)射光波波長大于630nm,產(chǎn)生紅色熒光分析PI熒光強(qiáng)度直方圖也可分析前散射光對側(cè)散射光的散點(diǎn)圖。

8、結(jié)果判斷:在前散射光對側(cè)散射光的散點(diǎn)圖或地形圖上,凋亡細(xì)胞與正常細(xì)胞相比,前散射光降低,而側(cè)散射光可高可低,與細(xì)胞的類型有關(guān);在分析PI熒光的直方圖時(shí),先用門技術(shù)排除成雙或聚集的細(xì)胞以及發(fā)微弱熒光的細(xì)胞碎片,在PI熒光的直方圖上,凋亡細(xì)胞在G1/G0期前出現(xiàn)一亞二倍體峰。如以G1/G0期所在位置的熒光強(qiáng)度為1.0,則一個(gè)典型的凋亡細(xì)胞樣本其亞二倍體峰的熒光強(qiáng)度為0.45,可用雞和鮭魚的紅細(xì)胞的PI熒光強(qiáng)度做參照標(biāo)準(zhǔn),兩者分別為0.35和0.7,可以確保在兩者之間的不是細(xì)胞碎片而是完整的細(xì)胞。

 

PI染色實(shí)驗(yàn)代測

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